HomeBiologiePractica ► DNA isoleren uit een kiwi

 

DNA isoleren uit een kiwi

Kiwi (Actinidia chinensis)


Inleiding

Het isoleren van DNA uit cellen is de eerste stap in veel onderzoek in de moleculaire biologie. Voordat je een bacterie ertoe kan brengen een stof te laten produceren waar in de medische wereld behoefte aan is, moet het bacterie-DNA worden geïsoleerd. Maar ook het modificeren van planten, bijvoorbeeld om ze resistent te maken tegen ziektes, begint met DNA-isolatie. Dat isoleren kan uit bacteriën, maar net zo goed uit een doodgewone kiwi.

 

Doel

DNA isoleren uit een kiwi.

Materiaal voor het prepareren van het kiwi-weefsel extract

kiwi, gedestilleerd water, bekerglas 400 ml, bekerglas 250 ml, zout, afwasmiddel/shampoo, vijzel en stamper, trechter, filterpapier, mes, snijplank, glasstaaf, waterbad, weegschaal en pipet van 10 ml.

 

Bereiding van het kiwi-extract

  • Weeg 3 gram zout af en meng dit met 10 ml. afwasmiddel/shampoo en 100 ml. gedestilleerd water in het bekerglas van 400 ml. Roer alles door elkaar.

  • Ontdoe de kiwi van zijn schil en snijd hem in kleine stukjes. Wrijf de kiwi fijn in een vijzel met stamper.

  • voeg de kiwimoes bij het mengsel wat je net hebt gemaakt.

  • Zet het geheel weg in een waterbad van 60 oC. Laat dit precies 15 minuten staan.

  • Filtreer het mengsel met behulp van een filterpapier en een trechter in het bekerglas van 250 ml.

  • Je hebt ongeveer 20 ml. filtraat (we noemen dit het kiwi-extract) nodig voor het vervolg van de proef. Wacht dus niet tot het mengsel in zijn geheel is doorgelopen.

  • Als je minder dan 10 minuten over hebt doe je het isoleren de volgende les. Zet je kiwi-extract dan wel in de koelkast.

 

Materiaal voor het scheiden van DNA uit het kiwi-extract

kiwi-extract, ijskoude ethanol, glasstaafje of Pasteurse pipet, pipet 10 ml, maatcilinder, wijde reageerbuis, reageerbuisrek.

 

Het isoleren van DNA uit het kiwi-extract

  • Pipetteer 10 ml kiwi-extract in een wijde reageerbuis.

  • Meet 10 ml ijskoude (uit de diepvries) ethanol af in een maatcilinder.

  • Houd de reageerbuis schuin en schenk de ijskoude ethanol heel voorzichtig(!) op het extract. Extract en ethanol moeten zo weinig mogelijk mengen.

  • Laat de reageerbuis vijf minuten helemaal stil staan.

  • Wacht tot je op het grensvlak van het extract en ethanol een soort gelatine met witte vlokken en gasbelletjes ziet. Dit is DNA met daarin ontstane gasbelletjes. Na enige tijd gaat deze prop omhoog door de opwaartse kracht in de gasbelletjes. Je kunt nu met een glasstaafje voelen hoe stevig de prop DNA is, of deze uit de reageerbuis halen met behulp van een Pasteurse pipet.

Reflectievragen

  1. Welke celonderdelen gaan vooral kapot tijdens het fijnwrijven in de vijzel?

  2. Welke celonderdelen gaan vooral kapot door het toevoegen van shampoo?

  3. Zout verandert de structuur van eiwitten. Wat doet zout met de chromosomen?

  4. In kiwicellen zit een eiwitsplitsend enzym dat de eiwitten in chromosomen splitst. Waarvoor is het in dit verband belangrijk dat het kiwimengsel precies 15 minuten in een waterbad van precies 60 °C staat?

  5. Het DNA ‘overleeft’ dit waterbad van 60 °C doordat het een stabiele structuur heeft. Waardoor is de structuur van DNA zo stabiel?

  6. Je hebt kennis gemaakt met het type werk dat biologisch analisten doen. Wat vind je van dit type werk? Is biochemisch werk iets voor jou? Waarom wel/niet?